一、生化試劑盒的測定原理?
生化試劑盒通過化學反應/酶促反應或物質結構特點測定樣本中物質含量或酶活;所用儀器一般為分光光度計和酶標儀,兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc,即當適當波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時,其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等 樣本均可以進行測定。
二、如何選擇不同規格的試劑盒?
首先根據本實驗的實際情況選擇,實驗室有酶標儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒;實驗室有分光光度計的,且有相應規格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購買前先閱讀的說明書,對其中自備的儀器和試劑進行確認。
三、 收到試劑盒后如何保存?
如果收到試劑盒,暫時不用,可按照外包裝上指示的溫度統一保存;拆開包裝后,請按照每個試劑的保存溫度進行保存,有些試劑忌反復凍融; 有些試劑為粉劑,溶解之后性質不穩定。
四、試劑盒的有效期是多長?
一般生化試劑盒有效期為6個月,也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年;具體以實際收到貨物的標簽信息為準。
五、收到試劑盒后應該從哪一步做起?
強烈建議客戶先拿出2-3個預期結果差別較大的樣本做預實驗。在實驗的過程中,首先將試劑盒中的說明書通讀一遍, 檢查試劑盒中各成分的量與說明書符不符合,溶解或使部分試劑回復至室溫,然后處理樣本,樣本提取完成后,再溶解一些粉劑,開始實驗。
六、買了多個試劑盒,樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎?
一般同一個系列的試劑盒中,酶活測定的提取液類似,含量測定的提取液類似。但具體的請具體查詢。
七、待測樣本必須是鮮樣的嗎?冷凍樣本是否可以用?
新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數指標的測定,有一些生理活性物質容易降解,建議用新鮮樣本測定, 如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線粒體復合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都 保存一周,-20保存一個月,-80保存3個月
八、土壤酶活性測定可以用鮮土嗎?
由于土壤顆粒大小不一致導致水分含量不一樣,且取樣量較少,為了保證測定的重復性,建議將鮮土風干并 過篩后取樣。若用鮮土測定,需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似,建議過40目篩后取樣,且同時測定 的樣本要保持一致,最好不要一組樣本用風干土,一組用鮮土,風干后的土樣在-20保存1個月測定大部分酶活 幾乎不會有損失;某些土壤的成分如硝態氮、銨態氮等在風干過程中會發生顯著變化,必須用新鮮樣品進行分析。
九、樣本研磨的方法?
樣本研磨我們一般用到三種方法:
1. 將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿,在勻漿的過程中注意勻漿器浸于冰中,防止因為摩擦引起的溫度過高,提取液可以在勻漿過程中或者勻漿后加入。
2. 用液氮勻漿,液氮研磨前將樣本洗凈,盡量剪成小塊,放入研缽中,加入液氮研磨,液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀,避免其過程中 反復凍融,同時要做好保護措施,防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提前稱量號也可研磨完后稱量。
3. 使用勻漿機進行勻漿,將稱好的組織放入離心管中,加入適量提取液,加入鋼珠。并將模塊提前遇冷,按照機器指示進行操作。一般的動物組織用 該方法效果尚可,有些機器對植物組織的處理效果不好。
十、測定前是如何調零?
使用分光光度計的用戶,用蒸餾水或相應的有機試劑直接調零。使用酶標儀的用戶,可以在一個孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水,作為調零孔, 也可不用調零,后續計算中會有空白孔。
十一、樣本如何稀釋或濃縮?
十二、如何保證測定溫度?
1. 根據說明書中測定溫度,提前打開保溫設備(如水浴鍋),設到溫度,在達到溫度后,把冷藏的試劑轉移到保溫設備中保溫10-30分鐘以上,以保證反應一開始,就在溫度中進行。
2. 對于擁有酶標儀的用戶,直接提前預熱,在達到設定溫度后,可以直接把預熱后的試劑,加入酶標板,然后開始反應。
3. 在保溫設備(水浴鍋和金屬浴,最好是前者)進行。注意提前對保溫設備進行預熱,達到設定溫度后再進行反應。但是僅適用于能夠終止的反應。 (4)對于瞬間完成的反應,或者對溫度不敏感的反應,為了提高重復性,最好在同一溫度下完成檢測。例如打開空調,設定在室溫,如25℃。 當然,所有控溫設備,都要進行預熱。
十三、 試劑盒有哪些常見規格?
1. 50管的試劑盒,常量法試劑盒,用分光光度計檢測。1mL的比色皿檢測。
2. 100管的試劑盒,微量法試劑盒,用酶標儀(酶標板)或者分光光度計(0.25 mL比色皿)檢測。
十四、試劑盒規格中是什么意思?
1. 50T/48S:50T指能夠做50次測定,48S指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是,50T/24S中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)
2. 100T/96S:100T指能夠做100次測定,96S指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或 者對照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100T/48S中由于每個樣品測 定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。
十五、試劑盒中含有干粉的試劑應該怎么稀釋保存?