*N-Orf1ab雙靶點雙重探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
- 價格： ￥5990/盒
- 發布日期： 2023-06-12
- 更新日期： 2024-11-01
產品詳請
| 產地 |
中國
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| 品牌 |
睿創
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| 貨號 |
RC-P60157R
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| 用途 |
科研實驗
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| 包裝規格 |
50次
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| 是否進口 |
否
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產品規格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
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樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳-染-性-病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
PCR試劑盒設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后*后加):
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器 需要使用 ROX 作為對照,其他熒光 PCR 儀器 (如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。
10. 蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 PCR(具體 PCR 參數可以根據儀器 不同而自行
優化)。
過程溫度時間
預變性95℃1 分鐘
PCR 反應95℃15 秒
(30 個循環)60℃15 秒
72℃15 秒
11. 數據采集
具體操作按所用儀器 推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合 DNA 時,
吸收光譜在 471 nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500 nm,發射光
譜在 530 nm。
四、數據處理
12. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品
的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
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