歡迎訪問天津睿創(chuàng)生物科技有限公司
服務(wù)熱線：17765108483
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| 產(chǎn)地 | 上海 |
| 保存條件 | 2-8℃ |
| 品牌 | 睿創(chuàng) |
| 貨號 | RC-P96912O |
| 用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
| 檢測方法 | 酶聯(lián)免疫法 |
| 保質(zhì)期 | 6個月 |
| 適應(yīng)物種 | 人,小鼠,大鼠,植物,魚,蝦,蟹,牛,羊,狗,貓,微生物,細(xì)胞,土壤等動植物 |
| 檢測限 | 詳詢 |
| 數(shù)量 | 99 |
| 包裝規(guī)格 | 96T/48T |
| 標(biāo)記物 | HRP標(biāo)記物 |
| 樣本 | 血清,血漿,唾液,尿液,組織,細(xì)胞上清,裂解液等 |
| 應(yīng)用 | 定性/定量/酶活檢測 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
人肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
20pg/ml-900pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)水平。用純化的人肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)，再與HRP標(biāo)記的肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2((MEF2)濃度。
試劑盒組成
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1 |
30倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
7 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
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2 |
酶標(biāo)試劑 |
6ml×1瓶 |
8 |
標(biāo)準(zhǔn)品（1600pg/ml） |
0.5ml×1瓶 |
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3 |
酶標(biāo)包被板 |
12孔×8條 |
9 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
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4 |
樣品稀釋液 |
6ml×1瓶 |
10 |
說明書 |
1份 |
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5 |
顯色劑A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2張 |
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6 |
顯色劑B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1個 |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
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800pg/ml |
5號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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400pg/ml |
4號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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200pg/ml |
3號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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100pg/ml |
2號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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50pg/ml |
1號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間 控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線， 做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔 孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請 乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
