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恩諾沙星(ENR)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書-睿創生物

發表時間:2023-08-30
恩諾沙星(ENR)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。
使用目的:

本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中中恩諾沙星(ENR)殘留的定量檢測。

實驗原理

本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有恩諾沙星(ENR)偶聯抗原,加入恩諾沙星(ENR)標準品或樣品,游離恩諾沙星(ENR)與微孔條上預包被的恩諾沙星(ENR)偶聯抗原互相競爭抗恩諾沙星(ENR)抗體酶標記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變為黃色,用酶標儀在450nm波長下進行檢測,吸光值與樣品中恩諾沙星(ENR)含量成反比,通過標準曲線計算樣品中恩諾沙星(ENR)的含量。

一、試劑盒組成

1. 預包被的恩諾沙星(ENR)偶聯抗原的可拆酶標板:1塊(12孔×8條)。

2. 恩諾沙星(ENR)標準品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ng/ml, 1ng/ml,3ng/ml ,9ng/ml ppb,27ng/ml,81ng/ml。

3. 抗恩諾沙星(ENR))抗體酶結合物:1瓶(6ml)。

3. 顯色液A:1瓶(6ml)。

4. 顯色液B:1瓶(6ml)。

5. 終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。

6. 樣本稀釋液:1瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。

7. 濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。

8. 說明書一份。

二、需要而未提供的材料

1. 設備

2. 波長450nm酶標儀。

3. 粉碎機。

4. 量筒。

5. 振蕩器。

6. 漏斗。

7. Whatman No 1或相當的濾紙。

8. 微量移液器。

9. 試劑

10. 去離子水或蒸餾水。

11. 甲醇。

12. 貯存

13. 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

14. 未用完的微孔板應該密封干燥保存

三、注意事項

1. 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。

2. 不要使用過期試劑盒。

3. 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。

4. 標準品中含有恩諾沙星(ENR),使用時應特別注意,操作時應戴手套。

5. 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

6. 不同標準品、樣品所用洗頭不能混用,否則會影響試驗結果。

7. 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用洗頭不得混用,否則會影響實驗結果。

8. 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果

9. 混合試劑時應避免起泡。

四、工作液準備

1. 恩諾沙星(ENR))標準品溶液:0ng/ml, 1ng/ml,3ng/ml ,9ng/ml ppb,27ng/ml,81ng/ml

2. 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

3. 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用

4. 顯色劑:已備用,避免光線直照

5. 反應終止液:已備用

五、樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則會出現結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

1. 取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

2. 強力振蕩3分鐘

3. 用Whatman No 1濾紙過濾

4. 取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數為2)

六、酶免分析步驟

1. 實驗須知

2. 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時間約2小時。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。

3. 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

4. 請不要改變分析程序

5. 請使用精確的微量移液器

6. 操作一旦開始,請不要中斷任何程序

7. ELISA結果的可重復性極大程度地取決于操作程序,請嚴格按照要求操作

8. 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣

9. 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面

七、分析步驟

1. 預先進行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測

2. 取所需數量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

3. 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

4. 在B0孔中加入50μl 0.0 ng/ ml標準品溶液

5. 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液

6. 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

7. 在所有孔中加入50μl的抗恩諾沙星(ENR)抗體酶結合物

8. 輕輕晃動反應板幾秒鐘。

9. 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)

10. 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。

11. 反應

12. 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯色液B;輕微晃動反應板使之徹底混勻

13. 37℃溫浴10min

14. 每孔中加入50μl終止液,混勻

15. 在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。

八、結果計算

1. 定量分析

2. 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ ml標準溶液的平均吸光度值

3. 以恩諾沙星(ENR)濃度的對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為恩諾沙星(ENR)濃度的對數值,求得反對數即為測定液中恩諾沙星(ENR)濃度C(ng/ml)

4. 由于樣品經過了預先稀釋,因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。

5. 半定量測定

6. 目測半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。

7. 儀器半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。

九、特異性

物質 交叉反應

恩諾沙星(ENR) 100%

十、試劑盒參數

本試劑盒檢測下限為0.05 ng/ml

B0吸光度最佳值應大于1.0

試劑盒吸光度板內誤差小于8%,板間誤差小于15%。

用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。

試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ng/ml~100ng/ml。

十一、分析限制

本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。

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