志賀氏菌屬通用探針法 qPCR 試劑盒使用說明

    志賀氏菌屬（Shigella spp.）通稱痢疾桿菌，革蘭染色陰性，是人類細菌性痢疾的病原菌，以病人和帶菌者為傳染源。志賀菌是重要的腸道病原菌，每年導致全世界一百多萬人死亡。據調查，志賀菌在我國內陸地區廣泛分布是各地衛生部門要重點檢測的致病菌。因此快速靈敏診斷志賀菌屬具有重要意義，因此快速檢測志賀氏菌屬具有重要的意義。本產品就是以探針法 qPCR 技術為基礎開發的專門檢測志賀氏菌屬的試劑盒，它具有下列特點：

1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.引物和探針經過優化，分析靈敏性高，可以達到 100 拷貝/反應。

本產品采用五孔盒包裝

成分	編號	規格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	981201	0.5 mL	0.5mL 本色蓋
熒光 PCR 模板專用稀釋液	180701	1 mL	1.5mL 綠蓋管
超純水	210806	1 mL	1.5mL 藍蓋管
志賀氏菌屬 qPCR引物-探針干粉	yp15-40000-ldd	50 次	1.5mL 棕色管
志賀氏菌屬 qPCR 陽性對照(1×10E7 拷貝/μL)	pc60908-40000	50 μL	0.5mL 黃蓋管
使用手冊	15-40000sc	1 份	無

一、稀釋標準曲線樣品

（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

成分	樣品管N+2 個	PCR 陰性對照	標準曲線樣品管（1-6 管）
2×Probe qPCR MasterMix	各 10 μL	10 μL	各 10 μL
志賀氏菌屬 qPCR引物-探針混合液	各 3 μL	3 μL	各 3 μL
N+2 個待測 DNA 樣本	各 7 μL	不加	不加
超純水	不加	7 μL	不加
第 6 步所得標準曲線樣品稀釋液（1-6 號）	不加	不加	各 7μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…）

11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行 PCR：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應 （45 個循環）	95℃	15 sec
	60℃	40 sec（采集 FAM 通道的熒光信號，淬滅基團為 MGB）